蛋白印痕法是一种蛋白质检测技术性，最开始是由外国人乔冶.斯塔克创造发明的。它运用电泳技术把特殊组织或体细胞中的蛋白提取，固定不动的NC膜或是PVDF膜上，再用特异性抗体检测特殊的抗原体。更是能寻找造成病症的抗原体，这类技术性如今已被普遍用以疾患诊断等好几个微生物行业。下边我们讨论一下它的猪脚流程。

一、基本原理

与Southern Blot或Northern Blot混种方式相近，但Western Blot法选用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检验物是蛋白，“探头”是抗原，“着色”用标识的二抗。历经PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离出来的蛋白试品，迁移到固相媒介（比如硝酸纤维素塑料薄膜）上，固相媒介以非共价键方式吸咐蛋白，且能维持电泳分离的活性多肽种类以及分子生物学特异性不会改变。以固相媒介上的蛋白或活性多肽做为抗原体，与相匹配的抗原起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗原起反映，历经底物着色或放射性自显影液以检验。

二、归类

Western Blot着色的方式关键有下列几类：

i. 放射性自显影液

ii. 底物电化学发光ECL

iii. 底物莹光ECF

iv. 底物DAB呈色

现常见的有底物电化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水准和试验标准的是用第一种方式，发表论文一般是用底物电化学发光ECL。要是买现有的检测试剂盒就可以了，实际操作也非常简单，基本原理以下（二抗用HRP标识）：反映底物为过氧化物 鲁米诺，如碰到HRP，即发亮，可使胶卷曝出，就可洗出来杂带。测电泳分离的特异性目地基因的表达的蛋白质成份。该技术性也广泛运用于检验蛋白质水准的表。

三、试品制取

1.单面贴壁细胞总蛋白的获取：

2. 组织中总蛋白的获取：

3. 加药品解决的贴壁细胞总蛋白的获取。

蛋白印痕法，一种找到基因的表达不正确造成的病症的方式。这类迅速能找的造成 病症的抗原体，而且特异性抗原（一种蛋白）被上色的优点，在科学研究遗传性疾病，遗传基因问题，病症的检验上应用许多。在其制做的基本上，也在持续发展趋势更新的无损检测技术，如Southern Blot混种方式。

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